淺析酶底物法檢測(cè)菌落總數(shù)整體解決方案
菌落總數(shù)作為水廠每日必檢的一個(gè)項(xiàng)目，通常與水體受到有機(jī)物污染的程度成正相關(guān)，其結(jié)果可以作為評(píng)判水質(zhì)清潔程度和考核凈化效果的指標(biāo)。
傳統(tǒng)的平皿計(jì)數(shù)法在檢測(cè)過(guò)程中面臨著多種挑戰(zhàn)，比如：對(duì)于環(huán)境和人員操作要求非常嚴(yán)格，前期準(zhǔn)備時(shí)間長(zhǎng)，需要配置培養(yǎng)基，測(cè)試結(jié)果因菌落較小或出現(xiàn)菌落蔓延導(dǎo)致結(jié)果計(jì)數(shù)偏差且不易觀察等。
在2023年10月1日正式實(shí)施的GB/T 5750.12-2023中針對(duì)水中菌落總數(shù)檢測(cè)新增加了酶底物法檢測(cè)方法。該方法相較于傳統(tǒng)的平皿計(jì)數(shù)法中存在的痛點(diǎn)，酶底物法在檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性、使用便捷性以及環(huán)境和人員操作要求等方面，都有很大幅度改善。
酶底物法檢測(cè)試劑使用基于復(fù)合酶底物計(jì)數(shù)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有多種酶底物，能夠被微生物生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的酶水解。
在36℃±1℃條件下培養(yǎng)48 h后可釋放熒光物質(zhì)4-甲基傘形酮（4-MU），其在366 nm紫外燈照射下可發(fā)出藍(lán)色熒光，配合84孔定量盤(pán)使用，對(duì)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光的培養(yǎng)盤(pán)孔槽，進(jìn)行計(jì)數(shù)并對(duì)比MPN表，即可確定原始水樣中可能的菌落總數(shù)。
酶底物法檢測(cè)菌落總數(shù)方法與傳統(tǒng)平皿法檢測(cè)方法對(duì)比
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環(huán)節(jié) |
方法對(duì)比 |
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平皿計(jì)數(shù)法 |
酶底物法 |
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前期準(zhǔn)備 |
需要提前配置培養(yǎng)基，進(jìn)行滅菌 |
無(wú)需培養(yǎng)基準(zhǔn)備，隨取隨用，方便快捷 |
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操作過(guò)程 |
加樣、注皿、冷卻等，操作繁瑣、時(shí)間長(zhǎng) |
直接加樣、倒盤(pán)，操作時(shí)間不少于1分鐘，簡(jiǎn)便快捷，可有效節(jié)省人工成本和縮短操作時(shí)間 |
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檢測(cè)范圍 |
30~300cfu/ml |
無(wú)需稀釋可檢1-738MPN/ml,范圍更大 |
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測(cè)試結(jié)果 |
1、需要耗費(fèi)較多精力進(jìn)行菌落肉眼計(jì)數(shù)
2、容易出現(xiàn)操作不當(dāng)，造成菌落蔓延，導(dǎo)致結(jié)果無(wú)法有效計(jì)數(shù) |
1、孔槽數(shù)量固定，直接計(jì)數(shù)熒光孔，查閱MPN表，即可確定水樣中可能菌落總數(shù)
2、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定
3、可以避免菌落蔓延干擾，準(zhǔn)確計(jì)數(shù) |
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人員、環(huán)境要求 |
對(duì)于人員操作要求非常嚴(yán)格（需要專(zhuān)業(yè)的無(wú)菌操作技術(shù)） |
降低人員操作的要求，方便、簡(jiǎn)單、快捷 |
由此我們可以看出，酶底物法檢測(cè)相較于傳統(tǒng)的平皿法優(yōu)勢(shì)多多：
1、操作便捷
無(wú)需準(zhǔn)備瓊脂平板，手工操作少于1min操作簡(jiǎn)單，降低了操作過(guò)程中的污染風(fēng)險(xiǎn)。
2、檢測(cè)范圍廣
檢測(cè)范圍為：1~738MPN/mL，比平板計(jì)數(shù)法范圍大，克服平板計(jì)數(shù)時(shí)部分菌落生長(zhǎng)過(guò)快，計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確的缺點(diǎn)。
3、快速讀取結(jié)果
48h顯示結(jié)果，72h內(nèi)觀察結(jié)果仍然有效，減少人員加班。
在國(guó)標(biāo)中菌落總數(shù)“平皿計(jì)數(shù)法”的檢測(cè)方法自1985年一直沿用至今，由于成本低而被廣大實(shí)驗(yàn)室所接受，但是已經(jīng)不能滿足現(xiàn)代的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)要求。而酶底物法則完全彌補(bǔ)了平皿計(jì)數(shù)法的不足，該方法穩(wěn)定、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且操作簡(jiǎn)便、快捷，更加適于普及推廣。
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